Hi,欢迎来到海西仪器城!
我的购物车
0
购物车中还没有商品,赶紧选购吧!
快速订单
产品分类
首页 > 细胞培养 > 细胞生物学(试剂) > 无血清及细胞治疗系列产品 > 百迪超级NK细胞无血清培养试剂套装(3L)Kit
- +

产品信息

适用范围试剂
使用方法一、试剂配制
1. 培养瓶包被液:18ml PBS加入本试剂盒1支试剂Ⅰ、1支试剂Ⅱ。
2. 增殖培养基:每1000ml免疫细胞无血清培养基中加入本试剂盒1支试剂Ⅴ。
3. 活化培养基的配制:配制完增殖培养基后,取出500ml增殖培养基,加入本试剂盒1支试 剂Ⅳ、1支活化培养基添加物。
二、取材
取材时使用一次性负压采血管抽取自体外周血 50ml。(建议使用枸橼酸钠或肝素抗凝剂) 或临床获得健康新生儿脐带血。(建议使用枸橼酸钠或肝素抗凝剂)。
三、NK细胞的培养
1. 培养前:T175 培养瓶中加入包被液,2-8℃冰箱过夜,或置于 37℃培养箱中至少包被 2h。
2. 第0天:取出2支高效离心管,分别加入15ml样本密度分离液,200g离心1min,确保离 心后隔片下充满分离液,隔片上有0.5-1cm高度分离液。小心将25ml抗凝血缓慢沿管壁 加至分离液界面上,确保血液及分离液之间有明显界面(每管可加15-25ml血液,若超 过25ml,则分管)。600g,离心30min(也可根据实际情况进行调节),注意慢升慢降。
3. 离心后可观察从上至下分为4层,淡黄色血浆层,白色环状PBMC层,分离液层,红细胞 层。用吸管吸取血浆层,做灭活处理。
4. 灭活步骤:置于水浴锅中56℃,30min;然后-20℃静置10min;最后800g,离心 15min,保留上清弃去沉淀,短期保存于4℃备用,长期保存请置于-20℃~-80℃环境下。
5. 用吸管吸取 PBMC 细胞层至 50ml 离心管中,为尽量获得更多细胞,建议隔片以上部分 全部吸取,注意不要吸到红细胞。在 PBMC 离心管中加入 PBS 混匀(PBS 量要多于吸取 的 PBMC 体积),600g,离心 10min。弃去上清,加入 PBS 复溶洗涤,300g,离心 10min。
分离出的 PBMC 用未加任何因子的免疫细胞无血清培养基配制成细胞悬液 40ml,加入 1 整套试剂Ⅲ(5 支全部加入),加入 1 支试剂Ⅸ。将上述所有液体加入到弃掉包被液的 培养瓶中,加入 8ml 自体血浆,置于饱和湿度、37℃、5.0% CO2 培养箱中培养。(注: 建议接种密度为 1-3×106 个/ml,如分离后细胞数少,则相对应减少培养基及血浆使用 量,但是活化因子添加量不变。)
注意:先使用完所有活化培养基,再使用增殖培养基。由于个体差异问题,每个样本生 长速度不一致,添加培养基的时间不一定要严格按照以下时间进行,需根据具体情况具 体分析, 确保细胞已经活化成功,呈现聚团生长的情况,细胞数量有增殖。在补加培养 基后,细胞密度维持在 1×106 个/ml,有利于细胞的生长。
6. 第 3 天加入 40ml NK 活化培养基,加入 5ml 血浆,加入 1 支试剂Ⅸ,1 支试剂Ⅵ。
7. 第5天加入70ml NK活化培养基,加入5ml血浆,加入1支试剂Ⅸ,1支试剂Ⅶ。
8. 第7天将培养瓶中细胞完全吹打下来,轻轻摇匀瓶内培养液,无菌取出0.5ml-1ml细胞液 计数,视细胞生长状态及细胞密度,建议加入剩余自体血浆并补加剩余的活化培养基。 转移到1个培养袋。
9. 第9天:轻轻摇匀袋内培养液,无菌取出0.5ml-1ml细胞液计数,视细胞生长状态及细胞 密度,建议培养袋补加增殖培养基500ml。
10. 第11-12天轻轻摇匀袋内培养液,无菌取出0.5ml- 1ml细胞液计数,视细胞生长状态及 细胞密度,建议培养袋补加增殖培养基1000ml 。(细胞总量达到20亿时进行此项操作)
11. 第13-15天轻轻摇匀袋内培养液,无菌取出0.5ml- 1ml细胞液计数,细胞总量达到30亿 时,建议培养袋补加增殖培养基1000ml。此时取样做细菌、真菌、支原体、内毒素检测。
12. 第15-18天收集NK细胞悬液3000ml,1500rpm×5min离心后弃去上清液,250ml离心 管集2管每管生理盐水200ml洗涤( 1500rpm×8min )1次 ,再用50ml离心管生理盐 水 100ml洗涤(1200rpm×5min )1次,按照100ml生理盐水+ 8ml 20%人血清白蛋 白重悬细胞,封装好后备用,同时留样封存以备日后检测。
13. 注:分批收获细胞:扩袋培养时,可收获一部分的细胞,剩余的部分继续补加增殖培养 基进行扩增(原则为按照细胞密度补液),客户可按照方案分批收集或一次性收集。
注意事项1. 使用前请仔细阅读本试剂盒说明书,并严格按照说明书执行操作。
2. 本试剂盒必须按规定温度保存,不可反复冻融。试剂在使用前需解冻,并充分混匀,不可 剧烈震荡。
3. 可视细胞生长的实际状况适当调整补液时间和用量。
声明仅用于科研使用,不能用于临床诊断和治疗。
保存条件根据说明书内容,有效期12个月。

产品详情

超级 NK 细胞无血清培养试剂套装(3L)是一款专为 NK 细胞培养而设计的无血清、无异源 动物成分的扩增培养试剂盒,产品性能高,质量稳定,适用血液类型范围广。超级 NK 细胞 培养方案将血液中内源性的 CD34+细胞诱导转化为 NK 细胞,且可抑制 T 细胞的增殖,因 此本款细胞因子试剂盒培养后 NK 纯度(CD3-CD16+CD56+)更高,新鲜脐带血、外周血 来源培养后 NK 纯度稳定在 95%以上,冻存细胞培养后 NK 纯度稳定在 85%以上。


该商品已成功加入购物车!

购物车共有1款商品。

该商品已成功加入报价篮!

报价篮共有1款商品。

提示
您的报价需求已收到
我们将会在一个工作日之内与您取得联系
感谢您的信任与支持!
销售热线
0592-6021609
400-0592-051
添加客服 更快获取信息
马上获取报价