产品信息
适用范围 | 试剂 |
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使用方法 | UC-MSC 原代培养(组织块法) 1. 配制 MSC 完全培养基,MSC 无血清培养基:MSC 培养基添加剂:青链双抗=500ml:25ml:5ml,4℃保存,2 周内使用。 2. 无菌条件下取新鲜脐带,用 DPBS 漂洗净血迹。一般脐带取得环境非无菌,可以稍微用75%酒精润洗。 3. 置于 10 cm 培养皿中,剪成 1~2cm 脐段,剔除血管,用 DPBS 洗净血迹,再剪成 1mm3 组织块。 4. 用无菌滴管吸取少量细小组织块均匀散布在 6 孔板 2 个孔中。 5. 37℃,5%CO 培养箱孵育 30min,以使组织块粘贴在培养皿壁上。 5. 向每孔滴加 0.8 ml 完全培养基(注意沿孔壁小心滴加,勿使冲动组织块)。 6. 37℃,5% CO2 培养箱孵育过夜,次日(D1)每孔再补加 1 ml 完全培养基。 7. 37℃,5% CO2 继续培养,5 天(D6)后半量换液(此时一般看不到细胞,但最快 3 天就可看到细胞从组织边沿爬出)。 8. 再过 5 天后半量换液(此时一般会有细胞爬出,但最晚可到 14 天会出现细胞从组织边沿爬出)。 9. 每 2 天换一次培养液,继续培养 2~4 天,待细胞密度达到约 80%后传代培养。 注意事项:组织块培养的关键是要保障组织块始终贴壁,换液动作要尽可能轻微,避免冲动组织块。培养基加量不能太多,以免组织块漂浮。 UC-MSC 传代培养与冻存 1. 待细胞融和度达到约 80%后进行传代(细胞不能太密集,否则容易分化),吸弃孔板中的培养基,每孔加适量 DPBS 轻轻冲洗 1 次。 2. 根据培养皿适量加入重组胰酶-EDTA,在 37℃,5% CO2 培养箱作用 3~5 min(可轻拍培养瓶帮助细胞脱落)。 3. 显微镜下观察细胞完全脱落后,使用 5ml MSC 无血清基础培养基,1000 rpm 离心 3~5 min。 4. 谨慎吸出上清,细胞团块用适当体积的完全培养基悬浮后,混匀细胞悬液。 5. 按照所需的比例进行传代或按照 7000-8000cells/cm2 的细胞密度将细胞接种至培养器皿中,放入 37℃,5% CO2 培养箱内培养。 6. 每 2-3 天更换一次培养基,待细胞融合度达到 80%左右时,参照上述操作步骤 1~5 做细胞传代;或者参照操作步骤 1~3 收获细胞冻存。 7. 细胞冻存:将细胞团块悬浮于适量无血清干细胞专用冻存液(无酚红)中,装入冻存管,2~8℃冰箱放置 30 min,-80℃冰箱放置 24 h,转入液氮罐冻存。 |
注意事项 | 1. MSC 无血清基础培养基和添加剂在室温或 2-8℃解冻,避免反复冻融。 2. 本产品启封前若有少量细小的凝聚物,是培养基成分的析出,属于正常现象,可轻轻混匀后使用; 3. 使用本产品时应严格按照无菌操作的规程进行操作; |
声明 | 仅用于科研使用,不能用于临床诊断和治疗。 |
保存条件 | 4℃ |
产品详情
BDBIO 间充质干细胞(MSC)培养基是一款无血清、无异源成分的培养基,用于多种来源(即骨髓、脂肪组织、脐带组织和牙髓) 间充质干细胞的生长和扩增,支持 MSC 的长期生长,同时保持其自我更新和多谱系分化潜力。