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产品信息
| 适用范围 | 试剂 |
|---|---|
| 使用方法 | 一、制作标准曲线 1. 细胞铺板：对收集的细胞悬液进行计数，然后接种细胞； 2. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔； 3. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100μL 培养基加 10μL（培养基体积的 10%） CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵 坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前 提条件是试验条件完全一致）。 二、细胞活性检测 1. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时； 2. 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ； 3. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时； 4. 用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。 三、细胞增殖-毒性检测 1. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100μL/孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时； 2. 向培养板加入不同浓度的待测药物； 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间； 4. 向每孔加入 10μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡)； 5. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时； 6. 用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。 四、计算公式 细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0 加药）-A（空白）]×100 A（加药）：具有细胞、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培养基和 CCK-8 溶液而没有细胞的孔的吸光度 A（0 加药）：具有细胞、CCK-8 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力 |
| 注意事项 | 1. 酚红和血清对 CCK-8 的检测不会造成干扰，可通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去， 因此不会对检测造成影响。 2. 若细胞毒性非常低，加入 WST-8 显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最 佳测定时间。 3. 如果待测物质有氧化性或还原性，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并 用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的 情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 4. 加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。终浓度为 1 mM 的氯化亚铅、氯化铁、 硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是 10mM 将会 100%抑制。 5. 不同的细胞系，加入 CCK-8 试剂后的反应时间不同，建议先做几个孔摸索接种细胞的数 量和加入 CCK-8 试剂后的培养时间。 6. 当使用标准 96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为 1000 个/孔 (100μL 培养基)。检 测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于 2500 个/孔 (100μL 培养基)。如 果要使用 24 孔板或 6 孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积 的 10%加入 CCK-8 溶液。 7. 建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。同时避免产生气泡，否则会干扰 OD 值读数。 8. 白细胞可能需要培养较长时间。 9. 使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，需要注意蒸发问题，可以采取弃用周 围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液。 10.以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板)：(a). 在显色反应后，将培养板放置 4°C 冰箱 内。(b). 每孔加 10μL 0.1M HCl 溶液。(c). 每孔加 10μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫 酸钠) 溶液，反应停止后，应在 24 小时内测定。 11.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
| 声明 | 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 |
| 保存条件 | 4°C 避光保存 12 个月；-20°C 避光保存 24 个月。 |
产品详情
细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）是一种基于 WST-8 在电子耦合试剂存在 的情况下，被线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜产物（formazan），生成的甲臜物的 数量与活细胞的数量成正比，使用酶标仪在 450nm 波长处测得的吸光值即可间接反映活细 胞的数量。细胞增殖越快，则颜色越深，细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜 色的深浅和细胞数目呈线性关系。CCK-8 广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度 检测。
BDBIO 细胞计数试剂盒（CCK8）仅一管已经配制好的含有 WST-8 的 CCK-8 溶液，无须再 进行任何配制操作，并且不必洗涤或收集细胞，使用便捷，加入 CCK-8 溶液显色后，可以在 不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间，可以用于大批量 样品的检测。
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